一、器材和染色液配制：

1.刀片、刀柄規格可按習慣選用，刀尖必須銳利，每處取材前須經火焰燒灼滅菌，并用酒精棉球擦凈，冷卻后使用。

2.載玻片，要求光滑無劃痕，潔凈無油脂，最好預先在正面一端用鉛筆編上號。初診和可疑患者查菌時最好用新的潔凈玻片。

3.染色液配制：

①石碳酸復紅溶液：

鹼性復紅酒精飽和溶液10毫升(鹼性復紅5～10克加95%酒精100毫升)

5%石碳酸溶液90毫升。

②1%鹽酸酒精：濃鹽酸1毫升70%酒精99毫升

③鹼性美蘭溶液：美蘭酒精飽和液30毫升(美蘭2克加95%酒精100毫升)

10%氫氧化鉀溶液0.1毫升，蒸餾水100毫升附注：

1.石碳酸復紅液配好后，需經過濾后方能使用。

2.鹼性復紅(Basic fachsin)又稱鹼性品紅。美蘭又稱次甲基蘭或亞甲蘭(Methylene blue)

二、取材：

1.取材部位：瘤型病人(包括BL和BB)應選取6處，眶上、顴部、下頷和耳垂各一處，皮損2處。結核樣型(包括BT)和未定類病人可酌情選取皮損2―3處。但在初診和最后判定是否達到臨床治愈時，應按對瘤型病人的要求進行取材。

皮損取材應選擇在損害最活躍處，如：環狀損害應選擇其紅色邊緣，隆起的斑塊應選擇最高起處，彌漫浸潤損害選擇浸潤顯著處，結節取其中心部。取材部位應準確，療效觀察病人取材部位數應前后一致。

2.取材部位經消毒后，用手指或適當的夾持工具將局部提取，并逐漸捏緊至無血色，如有瘀血，可用刀柄輕輕驅散。

3.用刀尖迅速刺入皮膚作一深2―3毫米、長3―5毫米之切口，用刀刃迅速刮2―3次，采取組織漿液。切口在手指或夾持工具松開后，立即用膠布或棉球加壓止血。

4.在玻片的確定位置上，用刀尖上的組織漿液作一適當大小的涂膜(直徑6毫米左右)。要求涂膜均勻，厚薄適當。組織漿不應混有血液。

5.涂膜自然干燥后，在酒精燈火焰上固定(以不燙手為宜)。

6.固定后及時染色。

三、染色：

1.加石碳酸復紅液于涂膜上，用酒精燈加溫至染液出現蒸氣。維持此狀態五分鐘。要注意不使染色液沸騰或干涸，染液將干時，要及時補加染液。

2.以清水緩慢沖去染液，滴加1%鹽酸酒精，搖動玻片，使涂膜脫至微帶粉紅色為止。時間一般約30秒鐘左右(對未達要求者可反復脫色)。

3.水洗后加鹼性美蘭液復染半―1分鐘，水洗自然干燥，鏡檢。

四、鏡檢：

1.染色后應盡可能及時鏡檢，如不可能，標本應保存在標本盒內。避免灰塵和光照。

2.顯微鏡要視野清晰，分辨率高;物鏡用90×或100×油浸鏡頭，目鏡以5―10×為宜。

3.為了減少涂膜中因細菌分布不勻造成的誤差，應選一定順序多檢幾個區域。

4.鏡檢結果，按所定標準記錄。